№ 14.578.21.0051 2 этап

Цель проекта - разработка и получение нового вида научно-технической импортозамещающей продукции с терапевтическим потенциалом, а именно, адресного бифункционального агента белковой природы «анти-HER2-токсин», предназначенного для селективной элиминации опухолевых клеток с повышенной экспрессией онкомаркера HER2. Оценка функциональной активности и терапевтического потенциала полученного адресного бифункционального агента «анти-HER2-токсин».

За 2 Этап реализации проекта:

 1. Получены экспериментальные образцы №1 и №2 анти-HER2-токсина в количестве 20.9 и 31.5 мг, соответственно.

 2. Разработана Программа и методики исследовательских испытаний экспериментальных образцов анти-HER2-токсина.

 3. Проведены испытания экспериментальных образцов №1 и №2 анти-HER2-токсина по физико-химическим и иммунохимическим свойствам в соответствии с Программой и методиками исследовательских испытаний, установившие полное соответствие методов получения и технических характеристик указанных образцов требованиям ТЗ. Установлено, что экспериментальные образцы №1 и №2 получены из растворимой внутриклеточной фракции лизатов клеток Escherichia coli в полном соответствии с разработанными на 1 этапе методиками. Выход биомассы продуцентов образцов №1 и №2 составил 12 и 20 г/л культуры, соответственно. Выход экспериментальных образцов №1 и №2 составил 20.9 и 157.5 мг/л культуры, соответственно.Установлено, что экспериментальные образцы №1 и №2 представляют два независимых варианта анти-HER2-токсина, соответствуют запланированной структуре белка и имеют следующие технические характеристики:

 представляют собой прозрачный опалесцирующий раствор  белка;

 соотношение поглощения раствора при длинах волн 280 нм и 260 нм составляет 1.95 и 1.94, соответственно;

 гомогенность (чистота) белков 96 и 97% , соответственно, по данным гель-электрофоретического анализа;

 растворимы в водных буферных растворах и сохраняют стабильность в оптимальных условиях хранения в течение 3-х месяцев;

 содержание бактериальных эндотоксинов  - менее 11.4 и 13.7 МЕ/мг, соответственно;

 по данным иммуноферментного конкурентного анализа специфично взаимодействуют с онкомаркером HER2 в интервалах концентраций 6.25-50 нМ и 29-225 нМ, соответственно.

4. Разработаны две методики исследования специфичности связывания вариантов анти-HER2-токсина с рецептором HER2, основанные на методе поверхностного плазмонного резонанса. Разработанные методики количественной оценки связывания анти-HER2-токсина с рецептором HER2:

основаны на взаимодействии анти-HER2-токсина с очищенным рекомбинантным фрагментом рецептора HER2, представляющего собой внеклеточный домен этого рецептора;

обеспечивают определение константы связывания комплекса анти-HER2-токсина с внеклеточным доменом рецептора HER2 используют метод поверхностного плазмонного резонанса.

5. Создана экспериментальная база, обеспечивающая проведение исследований по проекту.

6. Подведены итоги и подготовлен отчет.

7. Проведена валидация аналитических методик контроля качества экспериментальных образцов анти-HER2-токсина (за счет внебюджетных средств).

8. Выполнено материально-техническое обеспечение экспериментальной базы.

Впервые получены два принципиально новых рекомбинантных иммунотоксина, специфичных по отношению к клеткам, экспрессирующим онкомаркер HER2. Результаты исследования физико-химических и иммунохимических свойств иммунотоксинов свидетельствуют об их высокой чистоте, стабильности и позволяют перейти к испытаниям функциональных свойств иммунотоксинов на клеточных культурах.

Полученные результаты полностью соответствуют условиям Технического Задания и Плана-графика, выполняемого проекта. Уровень научно-технического выполнения задач соответствует мировому.

Разработанные в ходе работы на 1 этапе методики  использованы на 2 этапе для получения экспериментальных образцов анти-HER2 токсина №№1 и 2 и будут использованы на следующих этапах выполнения ПНИ для получения экспериментальных образцов анти-HER2 токсина №№3 и 4 и подготовки Лабораторного регламента получения анти-HER2 токсина. Бифункциональный рекомбинантный агент белковой природы, который ожидается получить в результате выполнения Проекта, является потенциальным противоопухолевым терапевтическим агентом и после (и в случае) прохождения всех стадий доклинических и клинических испытаний может быть использован для лечения опухолей с определенным молекулярным профилем.

Области применения полученных результатов: здравоохранение, фармацевтическая промышленность, наука и образование.

Внедрение разрабатываемого в рамках проекта инновационного бифункционального рекомбинантного агента белковой природы позволит снизить уровень смертности от онкологических заболеваний, в частности, рака молочной железы, а также уменьшить финансовое бремя государства по обеспечению граждан жизненно необходимыми и важнейшими лекарственными препаратами (ЖНВЛП).

Запланировано проведение работ по организации и выполнению опытно-конструкторских/технологических работ, направленных на разработку комплекта рабочей конструкторской документации в объеме и по качеству отработки, достаточного для постановки на производство определенного вида продукции или комплекта технической документации для организации процесса получения (производства) веществ, материалов и (или) технологического процесса. Необходимо проведение доклинических исследований, включая фармакологические и токсикологические анализы, а также клинических испытаний разрабатываемого бифункционального рекомбинантного агента белковой природы с последующим выпуском продукции в форме противоопухолевого препарата индустриальным партнером. Предполагаемые сегменты рынка сбыта – розничный покупатель и система здравоохранения. Возможен выход продукции как на внутренний, так и на внешний рынок.

Соисполнитель проекта  - Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биоорганической химии им. академиков М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова Российской Академии наук.